[TH] Kỹ thuật định nhóm máu hệ Rh

[tuyenlab]

KỸ THUẬT ĐỊNH NHÓM MÁU HỆ Rh

1. Nguyên lý:
Dùng huyết thanh chứa kháng thể anti D cho phản ứng với hồng cầu bệnh nhân để xác định kháng nguyên D trên bề mặt màng hồng cầu.

2. Chuẩn bị:

2.1. Dụng cụ:
- Đá men, ống nghiệm, pipet, nồi cách thủy, máy ly tâm.

2.2. Hóa chất:
- NaCl 0,9%
- Anti D – IgM
- Anti D – IgG/IgM.
- Huyết thanh Coombs (kháng kháng thể, kháng globulin người)

2.3. Bệnh phẩm
- Lấy máu, quan trọng hồng cầu của bệnh nhân.

3. Tiến hành:

3.1. Định nhóm máu trên đá men (sử dụng hóa chất Anti D IgM hoặc IgG/IgM).
- Lấy máu, chống đống bằng EDTA.
- Pha hồng cầu bệnh nhân theo tỉ lệ 35 – 45% trong NaCl 0,9% hoặc dùng ngay máu toàn phần.
- Đánh số 2 vị trí trên đá men 1, 2.
- Vị trí 1 nhỏ 2 giọt Anti D (IgM hoặc IgG/IgM).
- Vị trí 2 nhỏ 2 giọt NaCl 0,9% (làm chứng âm).
- Nhỏ vào mỗi vị trí một giọt hồng cầu bệnh nhân đã pha.
- Dùng đũa thủy tinh trộn đều, lắc khoảng 2 – 3 phút.
- Đọc kết quả.
+ Nếu vị trí 1 ngưng kết -> bệnh nhân có kháng nguyên D
+ Nếu vị trí 1 không ngưng kết -> bệnh nhân không có kháng nguyên D, khi đó cần xác định rõ bệnh nhân có kháng nguyên D yếu (Du) hay Rh (-) bằng phản ứng trên ống nghiệm.

3.2. Định nhóm máu trên ống nghiệm (sử dụng hóa chất Anti D IgG/IgM)
- Pha hồng cầu bệnh nhân 5%.
- Chuẩn bị 2 ống nghiệm đánh số 1, 2.
- O1: nhỏ 2 giọt Anti D (IgG/IgM).
- O2: nhỏ 2 giọt NaCl 0,9%.
- Thêm vào mỗi ống 1 giọt hồng cầu 5% bệnh nhân đã pha.
- Lắc đều, ly tâm, đọc kết quả.
+ Nếu ống 1 ngưng kết -> bệnh nhân có kháng nguyên D hay Rh(+).
+ Nếu ống 1 không ngưng kết -> chuyển sang giai đoạn 2.

Giai đoạn 2:
- Ủ 2 ống nghiệm trong nồi cách thủy 37oC/ 30 - 45’.
- Ghi kết quả sau đó chuyển sang giai đoạn 3.

Giai đoạn 3:
- Rửa 2 ống nghiệm 3 lần bằng NaCl 0,9%:
+ Thêm NaCl 0,9% vào 2 ống nghiệm, lắc đều, ly tâm 1500 vòng/phút x 5 phút, đổ phần dịch trong.
+ Tiếp tục bổ sung NaCl 0,9% ly tâm, tách dịch trong.
+ Làm như vậy 3 lần để thu được cặn hồng cầu sạch.
- Nhỏ vào mỗi ống 2 giọt huyết thanh Coombs (kháng kháng thể).
- Lắc đều, ly tâm 1000 vòng/phút.
- Lắc đều, đọc kết quả.
+ Nếu ống 1 ngưng kết -> bệnh nhân có kháng nguyên D yếu (hay Du).
+ Nếu ống 1 không ngưng kết -> Bệnh nhân có nhóm máu Rh(-).

4. Các yếu tố ảnh hưởng kết quả xét nghiệm:
- Chất lượng huyết thanh Anti D.
- Chất lượng huyết thanh Coombs
- Nhầm lẫ về thủ tục hành chính.

[nguyenhang.xn4a]

thầy cho e hỏi: dùng ống NaCl để chứng cho cái gì ạ?
và với sử dụng hóa chất Anti D IgM hoặc IgG/IgM khác nhau gì ạ?

[tuyenlab]

thầy cho e hỏi: dùng ống NaCl để chứng cho cái gì ạ?
và với sử dụng hóa chất Anti D IgM hoặc IgG/IgM khác nhau gì ạ?

- NaCl là ống chứng nước muối sinh lý (chứng âm), nếu ống này (+) thì sao? chứng tỏ hoặc hồng cầu của bệnh nhân tự ngưng kết (hồng cầu chuỗi tiền) hoặc có kháng thể lạnh, tự miễn trong huyết thanh bệnh nhân (chưa rủa hồng cầu mà). Vì vậy phải làm chứng này để loại bỏ ngưng kết do các nguyên nhân trên.

- IgM là kháng thể tự nhiên (kháng thể đầy đủ) gây ngưng kết ngay với hồng cầu mang kháng nguyên tương ứng, nhưng lại không ngưng kết với kháng nguyên D yếu. Do đó để xác định kháng nguyên D yếu phải dùng IgG/IgM hoặc IgG.

[nguyenhang.xn4a]

vậycó kháng thể tự miễn trên hông cầu thì sao ạ?

[tuyenlab]

vậycó kháng thể tự miễn trên hông cầu thì sao ạ?

Không có kháng thể tự miễn trên hồng cầu. Vì nếu có nó đã gây ngưng kết rồi do nó là kháng thể đầy đủ.

[nguyenhang.xn4a]

hì...e hiểu rồi ạ...cảm ơn thầy

[vocanhtung]

Dạ thưa thầy cho em hỏi ở giai đoạn 3 sau khi rửa 2 ống nghiệm 3 lần thì đã mất hết anti D, tại sao mình không bổ sung lại anti D mà cho luôn AHG vào ạh.
Và có trường hợp nào giai đoạn 2 ngưng kết mà giai đoạn 3 không ngưng kết không ạh, nếu giai đoạn 2 ngưng kết có thể kết luận bệnh nhân nhóm máu Rh dương yếu luôn không ạh.
E cảm ơn thầy!

[tuyenlab]

Dạ thưa thầy cho em hỏi ở giai đoạn 3 sau khi rửa 2 ống nghiệm 3 lần thì đã mất hết anti D, tại sao mình không bổ sung lại anti D mà cho luôn AHG vào ạh.
Và có trường hợp nào giai đoạn 2 ngưng kết mà giai đoạn 3 không ngưng kết không ạh, nếu giai đoạn 2 ngưng kết có thể kết luận bệnh nhân nhóm máu Rh dương yếu luôn không ạh.
E cảm ơn thầy!

Giai đoạn 3 là rửa để loại bỏ kháng thể anti D thừa. Nếu hc có kn D yếu thì sau khi ủ các kháng thể anti D sẽ gắn lên kn đó và không bị mất trong quá trình rửa. Sau khi cho coomb vào nó sẽ gắn kết với nhau gây ngưng kết. Kháng thể anti D IgG không gây ngưng kết ở giai đoạn 2 mà phải sau khi cho coomb nó mới ngưng kết.

[Rainoc]

KỸ THUẬT ĐỊNH NHÓM MÁU HỆ Rh

1. Nguyên lý:
Dùng huyết thanh chứa kháng thể anti D cho phản ứng với hồng cầu bệnh nhân để xác định kháng nguyên D trên bề mặt màng hồng cầu.

2. Chuẩn bị:

2.1. Dụng cụ:
- Đá men, ống nghiệm, pipet, nồi cách thủy, máy ly tâm.

2.2. Hóa chất:
- NaCl 0,9%
- Anti D – IgM
- Anti D – IgG/IgM.
- Huyết thanh Coombs (kháng kháng thể, kháng globulin người)

2.3. Bệnh phẩm
- Lấy máu, quan trọng hồng cầu của bệnh nhân.

3. Tiến hành:

3.1. Định nhóm máu trên đá men (sử dụng hóa chất Anti D IgM hoặc IgG/IgM).
- Lấy máu, chống đống bằng EDTA.
- Pha hồng cầu bệnh nhân theo tỉ lệ 35 – 45% trong NaCl 0,9% hoặc dùng ngay máu toàn phần.
- Đánh số 2 vị trí trên đá men 1, 2.
- Vị trí 1 nhỏ 2 giọt Anti D (IgM hoặc IgG/IgM).
- Vị trí 2 nhỏ 2 giọt NaCl 0,9% (làm chứng âm).
- Nhỏ vào mỗi vị trí một giọt hồng cầu bệnh nhân đã pha.
- Dùng đũa thủy tinh trộn đều, lắc khoảng 2 – 3 phút.
- Đọc kết quả.
+ Nếu vị trí 1 ngưng kết -> bệnh nhân có kháng nguyên D
+ Nếu vị trí 1 không ngưng kết -> bệnh nhân không có kháng nguyên D, khi đó cần xác định rõ bệnh nhân có kháng nguyên D yếu (Du) hay Rh (-) bằng phản ứng trên ống nghiệm.

3.2. Định nhóm máu trên ống nghiệm (sử dụng hóa chất Anti D IgG/IgM)
- Pha hồng cầu bệnh nhân 5%.
- Chuẩn bị 2 ống nghiệm đánh số 1, 2.
- O1: nhỏ 2 giọt Anti D (IgG/IgM).
- O2: nhỏ 2 giọt NaCl 0,9%.
- Thêm vào mỗi ống 1 giọt hồng cầu 5% bệnh nhân đã pha.
- Lắc đều, ly tâm, đọc kết quả.
+ Nếu ống 1 ngưng kết -> bệnh nhân có kháng nguyên D hay Rh(+).
+ Nếu ống 1 không ngưng kết -> chuyển sang giai đoạn 2.

Giai đoạn 2:
- Ủ 2 ống nghiệm trong nồi cách thủy 37oC/ 30 - 45’.
- Ghi kết quả sau đó chuyển sang giai đoạn 3.

Giai đoạn 3:
- Rửa 2 ống nghiệm 3 lần bằng NaCl 0,9%:
+ Thêm NaCl 0,9% vào 2 ống nghiệm, lắc đều, ly tâm 1500 vòng/phút x 5 phút, đổ phần dịch trong.
+ Tiếp tục bổ sung NaCl 0,9% ly tâm, tách dịch trong.
+ Làm như vậy 3 lần để thu được cặn hồng cầu sạch.
- Nhỏ vào mỗi ống 2 giọt huyết thanh Coombs (kháng kháng thể).
- Lắc đều, ly tâm 1000 vòng/phút.
- Lắc đều, đọc kết quả.
+ Nếu ống 1 ngưng kết -> bệnh nhân có kháng nguyên D yếu (hay Du).
+ Nếu ống 1 không ngưng kết -> Bệnh nhân có nhóm máu Rh(-).

4. Các yếu tố ảnh hưởng kết quả xét nghiệm:
- Chất lượng huyết thanh Anti D.
- Chất lượng huyết thanh Coombs
- Nhầm lẫ về thủ tục hành chính.

[LienDo_]

Thầy ơi cho em hỏi
Tại sao định nhóm máu Rh lại dùng huyết thanh mẫu mà không dùng hồng cầu mẫu ạ