Quy trình định lượng Immunoglobulin M (IgM)

[tuyenlab]

QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG IMMUNOGLOBULIN M (IgM)

1. Tổng quan:

IgM là Ig có trọng lượng phân tử lớn nhất trong các Ig (M= 971 kDa). Cấu trúc gồm 5 tiểu đơn vị xếp thành hình sao 5 cánh, Cấu trúc chuỗi nặng của IgM là chuỗi μ. IgM chiếm khoảng 7% các Ig trong huyết thanh, là Ig xuất hiện đầu tiên khi có kích thích của kháng nguyên. Vì vậy nó co vai trò quan trọng trong đáp ứng miễn dịch ở giai đoạn cấp tính : gây ngưng kết vi khuẩn, virus, ký sinh trùng đơn bào tạo điều kiện cho đại thực bào dễ dàng tiêu diệt chúng và có vai trò kích hoạt bổ thể.

2. Nguyên tắc:

Định lượng Ig M trong máu của bệnh nhân được xác định theo phương pháp miễn dịch đo độ đục.

3. Chuẩn bị:

3.1. Dụng cụ:
Máy phân tích AU400, AU640…

3.2. Hóa chất:
Hóa chất của hãng Olympus: Bảo quản tránh ánh sáng, ổn định 90 ngày sau khi mở nắp và bảo quản trên máy.
Dung dịch chuẩn: Multi protein calibrator.
Huyết thanh kiểm tra chất lượng của Olympus.

3.3. Bệnh phẩm:
Huyết thanh, huyết tương chống đông bằng Heparin, EDTA
Tránh sử dụng bệnh phẩm có độ đục cao.
Ổn định trong 4 tháng ở 15- 25ºC.

4. Calibration:

Được tiến hành hàng tháng hoặc khi thay lô hóa chất mới bằng dung dịch Multi protein calibration của hãng Olympus.

5. Kiểm tra chất lượng:

5.1. Mẫu huyết thanh kiểm tra IgA được tiến hành hàng tuần và khi có nghi ngờ, trên 2 mức (mức có giá trị bình thường và mức có giá trị bệnh lý).

5.2. Xử lý: kết quả kiểm tra chất lượng không vi phạm các luật của quy trình kiểm tra chất lượng thì mới tiến hành phân tịch cho bệnh nhân.

6.2. Tiến hành:

Bệnh phẩm được quay ly tâm tách huyết thanh (huyết tương) và phân tích tự động trên máy Olympus AU400, AU640.

7. Kết quả và biện luận:

Giá trị tham chiếu: 40- 230 mg/dL

7.1. IgA máu tăng:
Tăng nhiều dòng gặp trong: Xơ gan mật nguyên phát, nhiễm trùng hệ thống và thấp khớp cấp.
Tăng đơn dòng gặp trong: Bệnh Waldenstrom, bệnh bạch cầu. Sự tăng IgM trong suốt 4 tuần đàu sau sinh chỉ ra nhiễm trùng sơ sinh có tính chất bẩm sinh do mẹ bị Rubella, cytomegalovirus, nhiễm toxoplasma hay giang mai.

7.2. IgA máu giảm trong:
IgM hiếm khi giảm, thường liên quan đến sốt hồi quy.

8. Các yếu tố ảnh hưởng:

Nồng độ bilirubin trên 684 µmol/l gây nhiễu dưới 10% kết quả.
Nồng độ lipid huyết thanh trên 300 mg/dl gây nhiễu dưới 10% kết quả.
Nồng dộ haemoglobin 5g/l gây nhiễu dưới 3% kết quả.