1. HÓA CHẤT
1.1. Potassium hydroxide (KOH): 10%; 20%
+ KOH 10g hoặc 20g
+ Glycerin 10ml
+ Nước cất cho đủ 100ml
1.2. Dung dịch phẩm xanh Lactophenol Coton Blue (LPCB)
+ Lactic acid 20g
+ Phenol 20g
+ Xanh Cotton 50mg
+ Glycerin 40g
+ Nước cất 20ml
1.3. Nước muối sinh lý 8,5% hoặc 0,9%
+ NaCl 8,5 hoặc 9g
+ Nước cất 1000ml
1.4. Mực tàu hoặc Parker đen N051
+ Mực tàu (Nigrosin bột) 10g
+ Formol 10 % 100ml
2. MÔI TRƯỜNG
2.1. Thạch Sabouraud (Sabouraud dextrose agar)
+ Dextrose 40g
+ Peptone 10g
+ Thạch 20g
+ Nước cất 1000ml
Hòa tan tất cảtrong nước đun sôi, chỉnh pH sau cùng của môi trường đến 5,6. Phân phối môi trường vào
các ống nghiệm có nắp vặn, hấp khử trùng 118oC trong 10 phút. Lưu giữmôi trường ở 4oC – 6oC.
2.2. Sabouraud Cycloheximide Chloramphenicol agar ( Mycobiotic agar)
+ Glucose 20g
+ Peptone 10g
+ Thạch 20g
+ Chloramphenicol 50mg
+ Cycloheximide (Actidione) 500mg
+ Nước cất 1000ml
đun nóng đểhòa tan môi trường trong nước, cho thêm Chloramphenicol, Cycloheximide, hấp khử trùng
118oC trong 10 phút.
– Chloramphenicol
+ Chloramphenicol 50mg
+ Cồn ethylic 95o 10ml
Số lượng này dùng cho 1 lít môi trường (0,05mg/ml) có thể thay cho Chloramphenicol bằng:
* Streptomycine 40 đơn vị/ml môi trường
* Penicilline 20 đơn vị/ml môi trường
– Cycloheximide
+ Cycloheximide 500mg
+ Acetone 10ml
Số lượng trên dùng cho 1000ml môi trường.
2.3. Thạch khoai đường (Potato Dextrose Agar)
+ Khoai tây tươi hoặc bột 200g
+ Dextrose 10 – 20g
+ Nước cất 1000ml
Hầm khoai tây khoảng 1 giờ, nghiền nát lọc lấy nước, thêm nước cất cho đủ1000ml, thêm đường và 20g
thạch, đun sôi trởlại cho tan thạch, phân phối ra ống nghiệm có nắp vặn, hấp khửtrùng 120oC trong 10
phút, chỉnh pH sau cùng bằng 5,6.
2.4. Thạch bột bắp (Corn Meal Agar)
+ Bột bắp 50g
+ Thạch 15g
+ Nước cất 1000ml
Hòa tan bột bắp, thạch trong nước cất đun sôi, thêm 1% Tween 80 rồi phân phối ra ống nghiệm, đem
hấp khửtrùng 120oC trong 10 phút.
Ghi chú: để phân biệt Trichophyton rubrumvà Trichophyton mentagrophytes dựa vào sự thành lập sắc
tố (Trichophyton rubrumsinh sắc tố đỏ), người ta dùng môi trường này nhưng thay thế 1% Tween 80
bằng 1% Glucose.
2.5. Thạch tim óc hầm (Brain Heart Infusion = BHI)
+ BHI 40g
+ Thạch 15g
+ Nước cất 1000ml
Hòa tan tất cảtrong nước, đun sôi, hấp khửtrùng 120oC trong 15 phút, đểnguội 40 – 50oC, cho thêm
50ml máu "O", sau đó phân phối ra ống nghiệm hoặc đĩa.
2.6. BHI có Chloramphenicol và Cycloheximide
+ BHI 37g
+ Cycloheximide 500mg
+ Chloramphenicol 50mg
+ Thạch 20g
+ Nước cất 1000ml
đun nóng để hòa tan BHI, thạch, thêm Chloramphenicol và Cycloheximide, hấp khử trùng 118oC trong
10 phút.
2.7. Môi trường cơm (môi trường cháo hoa)
+ Gạo trắng 8g
+ Nước cất 25ml
Cho gạo trắng và nước cất vào trong ống nghiệm lớn hoặc trong bình Erlenmeyer – đậy nắp. Nấu chín.
Hấp khửtrùng 15 – 18 phút. đểnguội. Lưu giữ ởtủlạnh 4 – 6oC. Khi cấy, cho mảng nấm cần định danh
vào môi trường để ở nhiệt độ phòng.
3. THUỐC NHUỘM
3.1. Nhuộm PAS
+ Acid Periodic 5g
+ Nước cất 100ml
Pha xong để trong chai có nút vặn.
+ Basic fuchsin 0,1g
+ Cồn ethylic 95o 5ml
+ Nước cất 95ml
Chế nước cất vào rượu cho Basic fuchsin vào đến khi tan hết.
+ Hydrosulfite Zn hoặc Na 1g
+ Acid tartarique 5g
+ Nước cất 100ml
+ Light green 1g
+ Acid acetic băng 0,25ml
+ Cồn ethylic 80o 100ml
3.2. Nhuộm Gram
+ Tím gentian
+ Lugol
+ Cồn 90o hoặc cồn aceton
+ Fucsin kiềm
3.3. Nhuộm kháng acid
+ Fucsin acid
+ Cồn acid
+ Xanh methylen
1.1. Potassium hydroxide (KOH): 10%; 20%
+ KOH 10g hoặc 20g
+ Glycerin 10ml
+ Nước cất cho đủ 100ml
1.2. Dung dịch phẩm xanh Lactophenol Coton Blue (LPCB)
+ Lactic acid 20g
+ Phenol 20g
+ Xanh Cotton 50mg
+ Glycerin 40g
+ Nước cất 20ml
1.3. Nước muối sinh lý 8,5% hoặc 0,9%
+ NaCl 8,5 hoặc 9g
+ Nước cất 1000ml
1.4. Mực tàu hoặc Parker đen N051
+ Mực tàu (Nigrosin bột) 10g
+ Formol 10 % 100ml
2. MÔI TRƯỜNG
2.1. Thạch Sabouraud (Sabouraud dextrose agar)
+ Dextrose 40g
+ Peptone 10g
+ Thạch 20g
+ Nước cất 1000ml
Hòa tan tất cảtrong nước đun sôi, chỉnh pH sau cùng của môi trường đến 5,6. Phân phối môi trường vào
các ống nghiệm có nắp vặn, hấp khử trùng 118oC trong 10 phút. Lưu giữmôi trường ở 4oC – 6oC.
2.2. Sabouraud Cycloheximide Chloramphenicol agar ( Mycobiotic agar)
+ Glucose 20g
+ Peptone 10g
+ Thạch 20g
+ Chloramphenicol 50mg
+ Cycloheximide (Actidione) 500mg
+ Nước cất 1000ml
đun nóng đểhòa tan môi trường trong nước, cho thêm Chloramphenicol, Cycloheximide, hấp khử trùng
118oC trong 10 phút.
– Chloramphenicol
+ Chloramphenicol 50mg
+ Cồn ethylic 95o 10ml
Số lượng này dùng cho 1 lít môi trường (0,05mg/ml) có thể thay cho Chloramphenicol bằng:
* Streptomycine 40 đơn vị/ml môi trường
* Penicilline 20 đơn vị/ml môi trường
– Cycloheximide
+ Cycloheximide 500mg
+ Acetone 10ml
Số lượng trên dùng cho 1000ml môi trường.
2.3. Thạch khoai đường (Potato Dextrose Agar)
+ Khoai tây tươi hoặc bột 200g
+ Dextrose 10 – 20g
+ Nước cất 1000ml
Hầm khoai tây khoảng 1 giờ, nghiền nát lọc lấy nước, thêm nước cất cho đủ1000ml, thêm đường và 20g
thạch, đun sôi trởlại cho tan thạch, phân phối ra ống nghiệm có nắp vặn, hấp khửtrùng 120oC trong 10
phút, chỉnh pH sau cùng bằng 5,6.
2.4. Thạch bột bắp (Corn Meal Agar)
+ Bột bắp 50g
+ Thạch 15g
+ Nước cất 1000ml
Hòa tan bột bắp, thạch trong nước cất đun sôi, thêm 1% Tween 80 rồi phân phối ra ống nghiệm, đem
hấp khửtrùng 120oC trong 10 phút.
Ghi chú: để phân biệt Trichophyton rubrumvà Trichophyton mentagrophytes dựa vào sự thành lập sắc
tố (Trichophyton rubrumsinh sắc tố đỏ), người ta dùng môi trường này nhưng thay thế 1% Tween 80
bằng 1% Glucose.
2.5. Thạch tim óc hầm (Brain Heart Infusion = BHI)
+ BHI 40g
+ Thạch 15g
+ Nước cất 1000ml
Hòa tan tất cảtrong nước, đun sôi, hấp khửtrùng 120oC trong 15 phút, đểnguội 40 – 50oC, cho thêm
50ml máu "O", sau đó phân phối ra ống nghiệm hoặc đĩa.
2.6. BHI có Chloramphenicol và Cycloheximide
+ BHI 37g
+ Cycloheximide 500mg
+ Chloramphenicol 50mg
+ Thạch 20g
+ Nước cất 1000ml
đun nóng để hòa tan BHI, thạch, thêm Chloramphenicol và Cycloheximide, hấp khử trùng 118oC trong
10 phút.
2.7. Môi trường cơm (môi trường cháo hoa)
+ Gạo trắng 8g
+ Nước cất 25ml
Cho gạo trắng và nước cất vào trong ống nghiệm lớn hoặc trong bình Erlenmeyer – đậy nắp. Nấu chín.
Hấp khửtrùng 15 – 18 phút. đểnguội. Lưu giữ ởtủlạnh 4 – 6oC. Khi cấy, cho mảng nấm cần định danh
vào môi trường để ở nhiệt độ phòng.
3. THUỐC NHUỘM
3.1. Nhuộm PAS
+ Acid Periodic 5g
+ Nước cất 100ml
Pha xong để trong chai có nút vặn.
+ Basic fuchsin 0,1g
+ Cồn ethylic 95o 5ml
+ Nước cất 95ml
Chế nước cất vào rượu cho Basic fuchsin vào đến khi tan hết.
+ Hydrosulfite Zn hoặc Na 1g
+ Acid tartarique 5g
+ Nước cất 100ml
+ Light green 1g
+ Acid acetic băng 0,25ml
+ Cồn ethylic 80o 100ml
3.2. Nhuộm Gram
+ Tím gentian
+ Lugol
+ Cồn 90o hoặc cồn aceton
+ Fucsin kiềm
3.3. Nhuộm kháng acid
+ Fucsin acid
+ Cồn acid
+ Xanh methylen
