[TH] Chẩn đoán tụ cầu vàng gây bệnh

[tuyenlab]

1. Chuẩn bị phương tiện

Dụng cụ:
 Lam kính, ống nghiệm, bông thấm nước.
 Bơm kim tiêm, tăm bông, kim chích.
 Các dụng cụ nhuộm gram.

Hoá chất:
 Cồn sát khuẩn.
 Nước muối sinh lý.
 Các loại thuốc nhuộm gram.
 Huyết tương thỏ.
 Oxy già 10 thể tích.

Môi trường:
 Môi trường thạch máu.
 Môi trường canh thang glucose 2-5%.
 Môi trường schapman.

Bệnh phẩm:
Tuỳ theo từng bệnh do tụ cầu mà lấy bệnh phẩm thích hợp như mủ vết thương, mủ mụn nhọt đã vỡ, máu, dịch não tuỷ, dịch màng bụng, phân, nước tiểu.

2. Tiến hành phân lập

2.1. Quy trình phân lập

Chuẩn bị đủ dụng cụ và hoá chất, môi trường

Lấy bệnh phẩm đúng kỹ thuật theo từng bệnh.

Nhuộm gram để sơ bộ nhận định hình thể.

Nuôi cấy bệnh phẩm vào môi trường phân lập thích hợp, để tủ ấm 37oC trong 18-24 giờ.

Lấy khuẩn lạc nghi ngờ nhuộm soi hình thể.

Xác định các tính chất sinh vật hoá học:
- Làm phản ứng catalase.
- Cấy chuyển sang đĩa thạch máu để nhận xét tính tan máu .
- Cấy vào môi trường schapman
- Thử nghiệm coagulase trên lam kính.
- Thử nghiệm coagulase trên ống nghiệm.

Nhận định kết quả và kết luận.

2.2. Các tiêu chuẩn chẩn đoán xác định tụ cầu vàng

- Hình thể và tính chất bắt màu: Cầu khuẩn hình chùm nho, bắt màu gram dương.

- Hình thái khuẩn lạc và tính chất tan máu trên môi trường thạch máu: Khuẩn lạc nhỏ,tròn, lồi, màu vàng nhạt hoặc sẫm, tan máu.

- Phản ứng catalase dương tính:

- Lên men đường mannit: Nuôi cấy tụ cầu vào môi trường schapman, sau 24-48 giờ tụ cầu gây bệnh sẽ làm cho màu của môi trường chuyển từ màu hồng cánh sen sang màu vàng.

- Phản ứng đông huyết tương:

*Tiến hành trên lam kính (xác định men coagulase liên kết): men do vi khuẩn tiết ra trên bề mặt vi khuẩn.
+ Hoà đều vi khuẩn vào một giọt nước muối sinh lý trên lam kính
 + Nhỏ tiếp một giọt huyết tương thỏ, lắc đều.
+ Kết quả: Trong vòng 5 giây, nếu thấy vi khuẩn tụ lại thành các hạt nhỏ trên mặt hỗn dịch là coagulase liên kết dương tính. Nếu không có hiện tượng gì là âm tính

*Tiến hành trên ống nghiệm (xác định coagulase tự do): men do vi khuẩn giải phóng vào môi trường.
+ Cho vào 3 ống nghiệm nhỏ mỗi ống 0,5 mL huyết tương thỏ đã pha loãng 1/2 trong nước muối sinh lý.
 + Dùng que lấy vi khuẩn tụ cầu mẫu có coagulase (+) vào ống 1 , ống 2 để nguyên, ống 3 cấy tụ cầu cần xác định .
 + Để tủ ấm 37oC, đọc kết quả sau 6 giờ.
 + Kết quả:
*Ống 1 huyết tương đông lại không đổ ra khỏi ống được .
*Ống 2 huyết tương không đông.
*Ống 3 huyết tương đông là coagulase (+); không đông là coagulase (-).
Nếu kết quả đọc quá muộn thì có thể trở thành âm tính giả, vì nhiều tụ cầu tiết men fibrinolysin làm lỏng huyết tương trước đó đã đông.

[hoaithuong1992]

không có hình ảnh của tính chất tan máu trong môi trường thạch máu ạ?

[Trần Thị Thu]

thầy oi! tính chất svhh của tụ cầu vàng chỉ cần vậy thôi hay phải nói đầy đủ cả novobiocin nua ak.va ca DNase nua

[win1985]

thầy oi! tính chất svhh của tụ cầu vàng chỉ cần vậy thôi hay phải nói đầy đủ cả novobiocin nua ak.va ca DNase nua

chừng ấy thôi bạn. Novobiocin để phân biệt S.saprophyticus hay S.epidermidis thôi bạn chứ có liên quan gì đến tụ cầu vàng đâu

[skullsaphia]

thầy ơi giải thích giúp em là tại sao khi làm coagulase có 1 ống chứng đông rất chặt, 1 ống tụ cầu bệnh nhân cũng đông chặt nhưng 1 ống của bệnh nhân nữa là đông rất lỏng lẻo. Và tại sao khi xem quá 8h thì k thấy cục đông nữa ạ?

[phamsiquy]

thank

[VuBaVietPhuong]

thầy ơi giải thích giúp em là tại sao khi làm coagulase có 1 ống chứng đông rất chặt, 1 ống tụ cầu bệnh nhân cũng đông chặt nhưng 1 ống của bệnh nhân nữa là đông rất lỏng lẻo. Và tại sao khi xem quá 8h thì k thấy cục đông nữa ạ?

Thứ nhất chủng tụ cầu em làm chứng thường là chủng chuẩn atcc nên coagulase thường dương tính rất chuẩn. Còn tại sao hai bệnh nhân khác nhau thì phụ thuộc vào chủng tụ cầu bị nhiễm có khả năng tiết nhiều hay ít coagulase...
Thứ 2 nếu phản ứng coagulase trong ông nghiệm để quá lâu thì tụ cầu có enzym fibrinolysin sẽ ly giải cục đông và sẽ không thấy cục đông nữa

[m_hanh]

Thầy ơi cho e hỏi sao khi làm coagula trong ống nghiệm ta phải pha loẵng huyết tương đối thỏ với nước muối sinh lý ạ

[huệ lii]

Cho e hỏi tại sao phải pha loãng huyết tương bằng nước muối sl trong phản ứng coagulase tự do ạ

[Giang Sells]

Thầy ơi cho e hỏi ạ . phân lập chẩn đoán tc vàng từ bệnh phẩm mủ với nuôi cấy và xác định tc vàng trên thạch máu từ bp mủ có khác nhau không ạ. Phân lập chẩn đoán thì chỉ cần nhuộm gram với cấy phân lập thôi phải không ạ