04-17-2012, 12:27 PM
4.5. Nhuộm phophastase kiềm bạch cầu
4.5.1. Cơ chế:
Muối phốt phát của µ naphtol dưới tác động của men phosphatase kiềm bạch cầu trong môi trường có ion magie sẽ giải phóng ra µ naphtol. µ
naphtol kết hợp với muối diazo (fast blue) tạo thành một sản phẩm azo tủa, có màu.
naphtol kết hợp với muối diazo (fast blue) tạo thành một sản phẩm azo tủa, có màu.
4.5.2. Pha dung dịch nhuộm:
- Dung dịch đệm:
+ TRIS: 12,5g.
+ Nước cất: 12,5 ml.
+ Acid HCl 1N : 41ml.
+ Nước cất vừa đủ 500 ml, pH = 8,07.
- Dung dịch cơ chất:
+ 40 mg µ naphtol phosphat.
+ 1, 2 ml N-N dimethyl formamide.
+ Lắc đều cho tan hết.
+ Thêm vào 200 ml dung dịch đệm TRIS.
+ Khi nhuộm cho thêm vào hỗn dịch trên một ít muối fast blue sao cho hỗn dịch có màu xanh hơi nhạt.
- Dung dịch Kernetrot:
+ Nuclear fast red: 0,2g.
+ Al[sub]2[/sub](SO[sub]4[/sub])[sub]3[/sub] : 5 g.[sub] [/sub]
+ Nước cất: 100ml
Đun nóng để Al[sub]2[/sub](SO[sub]4[/sub])[sub]3 [/sub]tan hết trong nước cất, sau đó cho nuclear fast red vào để 5 phút, để nguội, thêm vào vài hạt thymol. Lọc trước khi sử dụng.
4.5.3. Kỹ thuật:
- Cố định tiêu bản máu và tuỷ bằng cồn focmol 10%: 15 phút.
- Rửa sạch, để khô.
- Ủ trong dung dịch nhuộm 1 giờ, 37 [sup]o[/sup]c.
- Rửa dưới vòi nước chảy, để khô.
- Nhuộm nền bằng dung dịch Kernetrot.
- Chú ý: tiêu bản phải được cố định ngay, càng sớm càng tốt kể từ khi lấy bệnh phẩm ra khỏi cơ thể.
4.5.4. Đọc kết quả:
Các tế bào dương tính có hạt màu xám đen trong bào tương. Tính score trong 100 tế bào cần xem xét.