[TH] Kỹ thuật nhuộm Hóa học tế bào

[tuyenlab]

4.3. Nhuộm PAS (Periodic Acid Schiff):

4.3.1.Cơ chế: Dưới tác động của periodic (HIO[sub]4[/sub]. 2H[sub]2[/sub]O), nhóm chức rượu của glycogen được chuyển thành aldehyt, sẽ tác dụng với thuốc thử schiff, cho hợp chất màu hồng tươi trong bào tương tế bào.

4.3.2. Pha dung dịch nhuộm:

a. Dung dịch periodic 1%:

- Periodic: 1g

- Nước cất : 100ml

b. Dung dịch schiff :

- Fuchsin basic: 0,5 g

- Nước cất: 100ml / 40-50 [sup]0[/sup]C.

- Lắc đều cho tan hết, để nguội, lọc.

- Thêm 0,9 ml acid HCl nguyên chất

- Thêm 0,5 g Na[sub]2[/sub]S[sub]2[/sub]O[sub]5[/sub]

Để trong tủ tối 24 giờ, dung dịch chuyển sang màu vàng nhạt .

Bảo quản trong lọ màu ở 4 [sup]0[/sup]C để dùng dần.

c. Dung dịch Hematoxyline:

(1): - Alun de kali : 25g

- Nước cất 350ml (đun sôi cho tan hết)

- Thêm 0,5g hematoxylin

(2): - Iodat kali (KIO[sub]3[/sub] ): 0,1g

- Nước cất: 50ml

Khi nào (1) đã nguội, trộn(1) và (2), sau đó cho thêm 100ml glycerin nguyên chất.

4.3.3. Quy trình nhuộm:

- Ngâm tiêu bản trong formol 10% : 10 phút.

- Rửa dưới vòi nước chảy 30 giây, để khô tự nhiên.

- Nhuộm periodic 1% : 10-15 phút.

- Rửa dưới vòi nước chảy 30 giây, để khô tự nhiên.

- Nhuộm schiff : 10-12 phút.

- Rửa dưới vòi nước chảy 30 giây, để khô tự nhiên.

- Nhuộm hematoxylin : 20 phút.

- Rửa dưới vòi nước chảy 30 giây, để khô tự nhiên.

4.3.4. Đọc kết quả:

Các tế bào dương tính có các hạt, cục màu đỏ tươi (màu hoa mười giờ) trong bào tương. Các tế bào dương tính lan toả (bào tương có màu đỏ tươi mịn, không có hạt) không có giá trị. Đọc kết quả giống như phương pháp nhuộm peroxydase.