01-01-2016, 03:33 PM
Chlamydia Real-time PCR hệ thống tự động
I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ
1. Mục đích
Xác định DNA đặc trưng của Chlamydia tracomatis
2. Nguyên lý
Bằng kỹ thuật Real-time PCR trên hệ thống tự động.
II. CHUẨN BỊ
1. Người thực hiện
- Người thực hiện: Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.
- Người nhận định và phê duyệt kết quả: Cán bộ xét nghiệm có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh.
2. Phương tiện, hóa chất
Phương tiện, hóa chất như ví dụ dưới đây hoặc tương đương.
2.1. Trang thiết bị
- Hệ thống máy tách chiết tự động, máy khuyếch đại và phát hiện tự động
- Hệ thống máy tính
- Máy vortex
- Tủ an toàn sinh học cấp 2
- Bộ lưu điện
- Tủ lạnh 2oC - 8oC
- Pipette nhựa 1-3ml
2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)
Lọ vô trùng
Bộ lấy mẫu và xử lý bệnh phẩm
Khay đựng bệnh phẩm
Hộp vận chuyển bệnh phẩm
Sinh phẩm chẩn đoán
Khấu hao sinh phẩm cho chạy chứng, kiểm tra chất lượng
Control (chứng dương+chứng âm)
Control Diluent
Kít tách DNA
Kít tách DNA 2
Elution plate
Extraction plate
Máng đựng hóa chất to 200ml
Máng đựng hóa chất nhỏ 50 ml
Tip CORE TIPS w. Filter 1ml
Giấy thấm
Giấy xét nghiệm
Sổ lưu kết quả xét nghiệm
Bút viết kính
Bút bi
Mũ
Khẩu trang
Găng không có bột tal
Găng tay xử lý dụng cụ
Quần áo bảo hộ
Dung dịch nước rửa tay
Cồn sát trùng tay nhanh
Dung dịch khử trùng
Khăn lau tay
EQAS (nếu thực hiện)*
* Ghi chú:
- Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 3 lần/1 năm).
3. Bệnh phẩm
Dịch cổ tử cung, dịch âm đạo, nước tiểu, dịch niệu đạo
4. Phiếu xét nghiệm
Điền đầy đủ thông tin theo mẫu yêu cầu
III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.
1. Lấy bệnh phẩm
Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (Xem phụ lục 3).
2. Tiến hành kỹ thuật: Cobas 4800 CT/NG test - Roche (VD)
2.1. Thu nhận và Xử lý mẫu
Bệnh phẩm lấy xong phải cho vào ống xử lý mẫu trong vòng 24 giờ.
2.2. Tách chiết DNA
Thực hiện tách chiết DNA tự động.
2.3. Thực hiện phản ứng real-time PCR
Khuyếch đại DNA real-time - PCR, đọc kết quả bằng máy tự động
IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
1. Điều kiện của phản ứng
- Chứng âm: Valid (Có giá trị)
- Chứng dương: Valid (Có giá trị)
* Không nhận các kết quả của chứng không có giá trị khi xuất hiện thông báo lỗi:
- Chứng âm: Invalid (Không có giá trị)
- Chứng dương: Invalid (Không có giá trị)
2. Phân tích kết quả
V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ
- Việc lấy mẫu, vận chuyển và bảo quản không đúng tiêu chuẩn có thể dẫn đến kết quả sai, cho dù phản ứng được thực hiện đúng.
- Khuyến cáo: Nhịn tiểu ít nhất 2 giờ, lấy tia đầu tiên.
Theo quyết định số 26 /QĐ-BYT ngày 03 tháng 01 năm 2013