06-05-2012, 11:39 PM
3.2. Môi trường phân lập vi khuẩn đường ruột
3.2.1. Môi trường Istrati
Công thức:
-Thạch thường 1000 mL.
- Lactose 15 g.
- Mật bò khô 8 g.
- Natri citrat 8 g.
- Natri hyposunfit 8,5 g.
- Sắt II citrat 2 g.
- Xanh bromothymol 20- 40 mL.
Cách pha xanh bromothymol:
Cân 1g bromothymol cho vào cối sứ nghiền đều. Nhỏ từng giọt 25 mL NaOH
0,4%. Cho nước cất vừa đủ 500 mL, đóng vào lọ dùng dần.
Pha chế:
- Chuẩn bị đủ dụng cụ: Đĩa petri, pipet, cân
- Chuẩn bị thạch thường và các hoá chất cần thiết (MT đã cất giữ trong tủ lạnh).
- Cân đủ các thành phần và hoá chất cho vào bình thạch thường.
- Đun sôi bình thạch cho tan đều, chỉnh pH 7,2.
- Cho dung dịch xanh bromothymol, đun sôi thêm 10 phút.
- Để thạch nguội 45- 500C, đổ đĩa petri, bảo quản ở tủ lạnh.
- Nhận xét kết quả: Môi trường có màu xanh cỏ úa, mịn, độ dày vừa phải.
3.2.2. Môi trường Endo
Công thức:
- Pepton 10 g.
- K2HPO4 3,5 g.
- Natri sunlfit 2,5 g.
- Lactose 10 g.
- Thạch sợi 20 g.
- Dung dịch Fuchsin 10% trong cồn 900: 4 mL.
- Nước cất 1000 mL.
Pha chế:
- Chuẩn bị đủ dụng cụ: ống đong, bình cầu, nồi nhôm, pipet, đĩa petri, đèn cồn.
- Chuẩn bị các loại hoá chất.
- Cân, đong đủ các thành phần của môi trường vào nồi nhôm.
- Đun sôi cho các chất hoà tan.
- Điều chỉnh pH 7,6.
- Đóng bình cầu, mỗi bình khoảng 300 mL, hấp 1100C/ 20 phút.
- Để môi trường nguội 500C, đổ đĩa.
- Nhận xét kết quả: Môi trường có màu hồng nhạt, độ dày vừa phải không nứt, không mềm.
3.2.3. Môi trường SS (Salmonella- Shigella agar)
Công thức:
- Cao thịt: 5 g.
- Pepton: 5 g.
- Lactose: 10 g.
- Muối mật: 8,5 g.
- Natri citrat: 8,5 g.
- Sắt citrat: 1 g.
- Xanh brilan (dung dịch 0,1% trong nước): 0,3 mL.
- Đỏ trung tính (dung dịch 1% trong nước): 2,5 mL.
- Thạch: 20 g.
- Nước cất: 1000 mL.
Pha chế:
- Chuẩn bị đủ dụng cụ: ống đong, bình cầu, cân,
pipet, đĩa petri, đèn cồn
- Chuẩn bị đủ hoá chất dùng cho môi trường.
- Cân, đong đủ các thành phần môi trường vào
bình cầu.
- Đun sôi nhỏ lửa, lắc đều cho tan hết các chất.
- Điều chỉnh pH 7,0- 7,2
- Để nguội 500C, đổ đĩa petri.
- Nhận xét kết quả: Môi trường có màu hồng,
mịn, đĩa thạch có độ dày vừa phải, không nứt,
không mềm, không có nước.
3.2.4. Môi trường Macconkey
Công thức:
- Pepton : 20 g.
- Lactose: 10 g.
- Muối mật: 1,5 g.
- Natri clorid: 5 g.
- Thạch sợi: 20 g.
- Nước cất: 1000 mL.
Pha chế:
- Chuẩn bị đủ dụng cụ: ống đong, bình cầu,
cân, pipet, nồi nhôm, đĩa petri, đèn cồn.
- Chuẩn bị đủ hoá chất để pha chế môi trường.
- Cân, đong đủ các thành phần của môi trường cho vào nồi.
- Đun nhỏ lửa, khuấy đều cho tan các chất.
- Điều chỉnh pH 7,2- 7,4.
- Nhỏ tiếp 0,6 mL đỏ trung tính 1%, khuấy đều
- Phân phối vào bình cầu, hấp 1100C 30 phút .
- Để nguội 500C, đổ đĩa petri.
Nhận xét kết quả : Môi trường có màu hồng
sẫm, các đĩa thạch không có nước, đủ độ dày.
3.2.1. Môi trường Istrati
Công thức:
-Thạch thường 1000 mL.
- Lactose 15 g.
- Mật bò khô 8 g.
- Natri citrat 8 g.
- Natri hyposunfit 8,5 g.
- Sắt II citrat 2 g.
- Xanh bromothymol 20- 40 mL.
Cách pha xanh bromothymol:
Cân 1g bromothymol cho vào cối sứ nghiền đều. Nhỏ từng giọt 25 mL NaOH
0,4%. Cho nước cất vừa đủ 500 mL, đóng vào lọ dùng dần.
Pha chế:
- Chuẩn bị đủ dụng cụ: Đĩa petri, pipet, cân
- Chuẩn bị thạch thường và các hoá chất cần thiết (MT đã cất giữ trong tủ lạnh).
- Cân đủ các thành phần và hoá chất cho vào bình thạch thường.
- Đun sôi bình thạch cho tan đều, chỉnh pH 7,2.
- Cho dung dịch xanh bromothymol, đun sôi thêm 10 phút.
- Để thạch nguội 45- 500C, đổ đĩa petri, bảo quản ở tủ lạnh.
- Nhận xét kết quả: Môi trường có màu xanh cỏ úa, mịn, độ dày vừa phải.
3.2.2. Môi trường Endo
Công thức:
- Pepton 10 g.
- K2HPO4 3,5 g.
- Natri sunlfit 2,5 g.
- Lactose 10 g.
- Thạch sợi 20 g.
- Dung dịch Fuchsin 10% trong cồn 900: 4 mL.
- Nước cất 1000 mL.
Pha chế:
- Chuẩn bị đủ dụng cụ: ống đong, bình cầu, nồi nhôm, pipet, đĩa petri, đèn cồn.
- Chuẩn bị các loại hoá chất.
- Cân, đong đủ các thành phần của môi trường vào nồi nhôm.
- Đun sôi cho các chất hoà tan.
- Điều chỉnh pH 7,6.
- Đóng bình cầu, mỗi bình khoảng 300 mL, hấp 1100C/ 20 phút.
- Để môi trường nguội 500C, đổ đĩa.
- Nhận xét kết quả: Môi trường có màu hồng nhạt, độ dày vừa phải không nứt, không mềm.
3.2.3. Môi trường SS (Salmonella- Shigella agar)
Công thức:
- Cao thịt: 5 g.
- Pepton: 5 g.
- Lactose: 10 g.
- Muối mật: 8,5 g.
- Natri citrat: 8,5 g.
- Sắt citrat: 1 g.
- Xanh brilan (dung dịch 0,1% trong nước): 0,3 mL.
- Đỏ trung tính (dung dịch 1% trong nước): 2,5 mL.
- Thạch: 20 g.
- Nước cất: 1000 mL.
Pha chế:
- Chuẩn bị đủ dụng cụ: ống đong, bình cầu, cân,
pipet, đĩa petri, đèn cồn
- Chuẩn bị đủ hoá chất dùng cho môi trường.
- Cân, đong đủ các thành phần môi trường vào
bình cầu.
- Đun sôi nhỏ lửa, lắc đều cho tan hết các chất.
- Điều chỉnh pH 7,0- 7,2
- Để nguội 500C, đổ đĩa petri.
- Nhận xét kết quả: Môi trường có màu hồng,
mịn, đĩa thạch có độ dày vừa phải, không nứt,
không mềm, không có nước.
3.2.4. Môi trường Macconkey
Công thức:
- Pepton : 20 g.
- Lactose: 10 g.
- Muối mật: 1,5 g.
- Natri clorid: 5 g.
- Thạch sợi: 20 g.
- Nước cất: 1000 mL.
Pha chế:
- Chuẩn bị đủ dụng cụ: ống đong, bình cầu,
cân, pipet, nồi nhôm, đĩa petri, đèn cồn.
- Chuẩn bị đủ hoá chất để pha chế môi trường.
- Cân, đong đủ các thành phần của môi trường cho vào nồi.
- Đun nhỏ lửa, khuấy đều cho tan các chất.
- Điều chỉnh pH 7,2- 7,4.
- Nhỏ tiếp 0,6 mL đỏ trung tính 1%, khuấy đều
- Phân phối vào bình cầu, hấp 1100C 30 phút .
- Để nguội 500C, đổ đĩa petri.
Nhận xét kết quả : Môi trường có màu hồng
sẫm, các đĩa thạch không có nước, đủ độ dày.