10-19-2012, 11:56 PM
NHUỘM TRICHOME (GOMORI – WHEATLEY)
1. Mô tả
- Nhuộm Trichome là một kỹ thuật nhuộm nhanh, đơn giản để nhuộm đơn bào đường ruột, nhất là để xem các trùng roi, tế bào của người, nấm hạt men và các KST giả trong khoảng 45 phút.
- Có thể dùng để nhuộm mẫu phân tươi hoặc lưu trong cồn Polyvinyl hay phân mới được gắn với dung dịch Schaudinn.
- Không dùng để nhuộm mẫu phân đã được tập trung bằng formol – ether.
2. Vật liệu, hoá chất
a, Thuốc nhuộm Trichome
- Thành phần:
+ Chromotrope 2R : 0,6g
+ Light green SF : 0,3g
+ Phosphostungstic acid :0,7g
+ Acectic acid băng :1,0ml
+ Nước cất : 100ml
- Cách pha và bảo quản:
+ Cho 1,0ml acid acetic vào các chất nói trên.
+ Để yên trong 15 – 30 phút ở nhiệt độ phòng.
+ Cho 100ml nước cất vào, dung dịch có màu tím.
+ Bảo quản trong lọ thuỷ tinh hoặc nhựa ở nhiệt độ phòng. Giữ được trong 24 tháng.
b, Dung dịch cồn ethylic-Iod
- Thành phần:
+ Ìod: 1 – 2g
+ Cồn ethylic 70o : 100ml
- Bảo quản trong lọ màu tối.
- Khi dùng pha loãng với cồn ethylic 700 cho tới khi có màu trà đậm.
- Giữ được khoản 1 tuần hoặc tới khi nào thấy màu nhạt thì bỏ.
c, Dung dịch Acid - cồn ethylic
- Cồn ethylic 90o: 99,5ml
- Acid acetic băng : 0,5ml
3. Quy trình nhuộm
Cố định tiêu bản phân là bước rất quan trọng trong quá trình nhuộm để có được tiêu bản đẹp. Trước đây, người ta thường cố định tiêu bản phân bằng dung dịch straudinn có thuỷ ngân, rất độc, nên ngày nay người ta có thể dùng dung dịch straudinn để cố định hay bỏ tuỳ người sử dụng.
a, Quy trình cố định tiêu bản bằng dung dịch straudinn
1. Nhúng ngay vết phân vừa làm xong vào trong dung dịch straudinn, để 30 phút hoặc qua đêm, sau đó lấy tiêu bản ra và nhúng lần lượt vào:
2. Cồn 70o : 5 phút
3. Cồn 70o + iod : 1 phút (đối với phân tươi)
5 – 10 phút (phân bảo quản trong PVA)
4. Cồn 70o: 5 phút
5. Cồn 70o: 3 phút
6. Thuốc nhuộm Trichome: 10(8 – 15) phút
7. Cồn 90o + 1% Acid acetic: 1 – 3 giây
8. Nhúng tiêu bản trong cồn: 100o nhiều lần
9. Cồn 100o (mới) : 3 phút
10. Cồn 1000o(mới) : 3 phút
11. Xylen : 5 – 10 phút
12. Dán tiêu bản bằng Balsam Cho đến khi khô
b, Quy trình không dùng dung dịch Straudinn
Nhúng tiêu bản phân vào:
1. Cồn 70o : 5 phút
2. Cồn 70o: 3 phút
3. Thuốc nhuộm Trichome : 10(8 – 15) phút
4. Cồn 90o + 1% Acid acetic : 1 – 3 giây
5. Nhúng tiêu bản trong cồn 100o: nhiều lần
6. Cồn 100o (mới) : 3 phút
7. Cồn 100o (mới) : 3 phút
8. Xylen: 5 – 10 phút
9. Balsam : Cho đến khi khô
Quan sát dưới kính hiển vi với vật kính dầu x100, nền sẽ có màu đỏ hay xanh lá cây, đơn bào có màu xám nhạt hay lá cây xanh nhạt.
4. Kết quả
- Thể hoạt động và bào nang của đơn bào được nhận thấy dễ dàng.
- Trứng giun, sán, và ấu trùng có thể khó nhận diện vì thuốc nhuộm đậm đặc.
- Có thể nhận ra nấm men, sợi tơ nấm giả và các bạch cầu.
- Không thấy được trùng bào tử như Cryptosporidium sp.