Qui trình nuôi cấy phân lập vi khuẩn Neisseria meningitidis

[tuyenlab]

3.2.3. Xét nghiệm định danh não mô cầu:

Nếu vi khuẩn phát triển trên các môi trường nuôi cấy (thạch máu 5% hoặc thạch sôcôla), nhặt khuẩn lạc nghi ngờ cấy thuần trên một đĩa thạch mới để nhuộm Gram xem hình thể và làm các thử nghiệm xác định sau đây:

Thử nghiệm oxidase:
Làm ướt thanh giấy lọc đã được sấy vô khuẩn từ trước bởi thuốc thử oxidase (tetramethyl-p-phenylenediamine hydrochloride), lấy que cấy nhựa (1µl) gặt 1 khuẩn lạc nghi ngờ và quệt lên thanh giấy đã tẩm thuốc thử oxidase, nếu vùng giấy được quệt vi khuẩn chuyển màu tím tía được đọc là dương tính (vi khuẩn có cytochrome oxidase - là một thành phần trong chuỗi hô hấp của vi khuẩn).

Thử nghiệm oxy hóa đường (Cystine Trypticase Agar (CTA):
Thử nghiệm phản ứng sinh hoá với 4 loại đ­­ường Glucose (hay Dextrose), Maltose, Lactose và Sucrose xác định đặc tính oxi hóa carbohydrate sinh axit của vi khuẩn (có đỏ phenol là chỉ thị màu) như sau:

- Cấy thuần vi khuẩn cần xác định là não mô cầu lên môi trường thạch máu cừu 5% hoặc thạch sôcôla 16-18 giờ.

- Lấy một vài khuẩn lạc cần xác định là não mô cầu lần lượt ria cấy sâu 10 mm vào các ống thạch CTA sau: CTA (không có đường), CTA + Glucose, CTA + Maltose, CTA + Lactose và CTA + Sucrose, mỗi lần cắm khuẩn lạc phải đổi ăng hoặc đốt ăng cấy.

- Đậy nắp những lọ hay ống nghiệm sinh hoá này, ủ ở tủ ấm 35[sup]0[/sup]C - 37[sup]0[/sup]C không có CO2.
Đọc kết quả sau 4-72 giờ. Sau 72 giờ nếu âm tính mới được hủy ống thử nghiệm.

Phản ứng dương tính (+) khi: phần trên của ống nghiệm sẽ thấy đục và chuyển màu vàng do não mô cầu sinh axit khi sử dụng đường glucose và maltose (theo kiểu ôxi hoá đường), nhưng không sử dụng đường lactose và sucrose.