02-05-2016, 12:14 PM
HBV genotype PCR
I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ
1. Mục đích
Sử dụng cặp mồi đặc hiệu để xác định genotype của HBV (virus viêm gan B)
2. Nguyên lý
Dựa trên nguyên lý của kỹ thuật PCR
II. CHUẨN BỊ
1.Người thực hiện
- Người thực hiện: Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.
- Người nhận định và phê duyệt kết quả: Cán bộ xét nghiệm có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh.
2.Phương tiện, hóa chất
Phương tiện, hóa chất như ví dụ dưới đây hoặc tương đương.
2.1. Trang thiết bị
- Tủ an toàn Sinh học cấp 2
- Máy PCR
- Máy điện di
- Máy đọc điện di
- Máy ly tâm 25000 x g
- Máy ly tâm dùng cho tube 0,2 ml
- Máy ủ nhiệt
- Máy vortex
- Micropipette
- Bộ lưu điện
2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)
Bông
Cồn
Bơm kim tiêm
Panh
Khay đựng bệnh phẩm
Hộp vận chuyển bệnh phẩm
Tube đựng bệnh phẩm
Găng không có bột
Sinh phẩm chẩn đoán
Khấu hao sinh phẩm cho kiểm tra lại
EQAS (nếu thực hiện) *
Kit tách chiết DNA từ virus
DNA marker
Primer 1-1 xác định genotype A
Primer 1-2 xác định genotype A
Primer 2-1 xác định genotype B
Primer 2-2 xác định genotype B
Primer 3-1 xác định genotype C
Primer 3-2 xác định genotype C
Primer 4-1 xác định genotype D
Primer 4-2 xác định genotype D
Primer 5-1 xác định genotype E
Primer 5-2 xác định genotype E
Primer 6-1 xác định genotype F
Primer 6-2 xác định genotype F
Primer 7-1 xác định genotype G
Primer 7-2 xác định genotype G
Primer 8-1 xác định genotype H
Primer 8-2 xác định genotype H
Ống Eppendorf 1,5 ml
Ống Eppendorf 0,2 ml
Đầu côn 10 µl có lọc
Đầu côn 30 µl
Đầu côn 200 µl có lọc
Đầu côn 1 ml có lọc
Ethanol BDH
Water-DEPC Treated
Thạch
Ladder
Blue Juice Gel loading dye
Ethidium Bromide
TAE Buffer
Giấy thấm
Giấy xét nghiệm
Sổ lưu kết quả xét nghiệm
Bút viết kính
Bút bi
Mũ
Khẩu trang
Găng tay
Găng tay xử lý dụng cụ
Quần áo bảo hộ
Dung dịch nước rửa tay
Cồn sát trùng tay nhanh
Dung dịch khử trùng
Khăn lau tay
* Ghi chú: Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) ) là 1/50 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).
3.Bệnh phẩm
Huyết thanh, huyết tương
4.Phiếu xét nghiệm
Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu
III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.
1. Lấy bệnh phẩm
- Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (xem phụ lục 3)
- Từ chối những bệnh phẩm không đạt yêu cầu (xem phụ lục 6).
2. Tiến hành kỹ thuật
2.1. Tách chiết DNA tổng số
2.2. Thực hiện PCR
2.3. Điện di kiểm tra sản phẩm
2.4. Đánh giá và kết luận
IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
Sản phẩm PCR phải có một băng đặc hiệu duy nhất, rõ nét và không bị đứt gẫy và có kích thước phù hợp tương ứng với thang DNA chuẩn.
V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ
Trong trường hợp không có sản phẩm PCR, cần phải kiểm tra lại quá trình tách chiết DNA tổng số, chất lượng primers và master mix, và thực hiện lại xét nghiệm.
Theo quyết định số 26 /QĐ-BYT ngày 03 tháng 01 năm 2013