+- Diễn đàn xét nghiệm đa khoa (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan)
+-- Diễn đàn: ...:::THẢO LUẬN CHUYÊN NGÀNH:::... (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-8.html)
+--- Diễn đàn: Hóa sinh - Miễn dịch (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-11.html)
+---- Diễn đàn: Thực hành (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-100.html)
+---- Chủ đề: [TH] Xác định hoạt độ enzym Cholinesterase (CHE) (/thread-713.html)
[TH] Xác định hoạt độ enzym Cholinesterase (CHE) - tuyenlab - 09-04-2012
1.Nguồn gốc và vai trò của CHE :
CHE là enzym có tính đặc hiệu không cao, thuỷ phân acetylcholin, các ester cholin và không cholin khác. Acettlcholin, chất trung gian hoá học được giải phóng ở các tận cùng dây thần kinh trong dẫn truyền xung động thần kinh.
Dựa vào động học và bản chất của CHE, người ta phân nó làm 2 loại:
• CHE thật ở hồng cầu và hệ thống thần kinh
• CHE giả thấy ở huyết tương và các cơ quan khác: Gan, niêm mạc ruột và tuỵ, chất trắng của tế bào thần kinh.
2. Nguyên tắc kỹ thuật:
Cholinesterase ( CHE ) thuỷ phân butyrylthiocholine tạo thành thiocholine và butyrate.
Phản ứng giữa thiocholine và Dithiocholinenitrobenzoate (DTNB) tạo phức hợp màu vàng (tăng dần).
CHE
Butyrylthiocholine + H2O -------------------> Thiocholine+ butyrate
Thiocholine + DTNB ---------------------> 2 Ni tro-5mecaptobenzoate ( mầu vàng)
Butyrylthiocholine + H2O -------------------> Thiocholine+ butyrate
Thiocholine + DTNB ---------------------> 2 Ni tro-5mecaptobenzoate ( mầu vàng)
Đậm độ màu vàng tăng dần được xác định ở bước sóng 405nm với 3 điểm đo (tại thời điểm 30 giây, 60 giây và 90 giây), theo phép đo kinetic.
3. Hoá chất:
* Thuốc thử R1 : Dung dịch đệm.
- Đệm phosphat : 50mmol/l, pH7,7
- DTNB : 0,25mmol/l
* Thuốc thử R2 : Có chất
Butyrylthiocholine : 6mmol/l
Các loại thuốc thử này thường đóng dạng đông khô, được bảo quản ở nhiệt độ lạnh 2 - 8oC. Khi làm xét nghiệm sẽ tiến hành hoà tan bằng nước cất
Cách pha như sau:
- R1: Cho thêm 30ml nước cất hoà tan (để bền được 6 tuần ở nhiệt độ 2oC - 8oC).
- R2: Cho thêm 1ml nước cắt hoà tan, bền 6 tuần ở 2oC - 8oC.
4. Tiến hành xét nghiệm:
Cho vào ống nghiệm sạch
R1: 1,5ml
Huyết thanh: 100µl
R2: 50µl
Lắc đều đưa ngay vào đo trên máy phân tích ở 3 điểm đo sau, 30, 60, 90 giây với bước sóng 405nm.
Kết quả: CHE = U/l = mật độ quang DA x 23460 (Hệ số k)
( Chú ý: Hệ số K tuỳ thuộc từng hãng sản xuất )
5. Nhận định kết quả:
* Trị số bình thường ở nhiệt độ 37oC: 3600 - 900 U/l.
* Tăng trong viêm gan cấp, trong hội chứng thận hư, trong nghiện rượu và bệnh đái tháo đường.
• Giảm trong nhiễm độc phospho hữu cơ, trong bệnh thiếu sắt, thiếu máu ác tính, ung thư gan di căn.