+- Diễn đàn xét nghiệm đa khoa (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan)
+-- Diễn đàn: ...:::THẢO LUẬN CHUYÊN NGÀNH:::... (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-8.html)
+--- Diễn đàn: Vi sinh Y học (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-71.html)
+---- Diễn đàn: Thực hành (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-98.html)
+---- Chủ đề: HCV Ag/Ab miễn dịch bán tự động (/thread-5778.html)
HCV Ag/Ab miễn dịch bán tự động - tuyenlab - 02-18-2016
HCV Ag/Ab miễn dịch bán tự động
I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ
1. Mục đích
Phát hiện kháng nguyên, kháng thể HCV Ag/Ab trong máu.
2. Nguyên lý
Dựa trên nguyên lý của kỹ thuật ELISA (miễn dịch gắn enzym) (VD).
II. CHUẨN BỊ
1. Người thực hiện
- Người thực hiện: Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.
- Người nhận định và phê duyệt kết quả: Cán bộ xét nghiệm có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh.
2. Phương tiện, hóa chất
Phương tiện, hóa chất như ví dụ dưới đây hoặc tương đương.
2.1.Trang thiết bị
- Dàn máy ELISA.
- Máy ly tâm thường.
- Tủ âm sâu (-20oC) (nếu có).
- Tủ lạnh 2oC - 8oC
- Micropipet vi lượng 100µl, 1000 µl.
- Giá đựng ống máu
- Bộ pipetman 8 kênh (nếu có).
- Ống đong có vạch dung tích 25ml, 100ml, 1000ml
2.2.Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)
Bông
Dây garô
Tube đựng bệnh phẩm
Sinh phẩm chẩn đoán
Khấu hao sinh phẩm cho chạy chứng, kiểm tra chất lượng
Chứng ngoại kiểm âm (nếu có)
Chứng ngoại kiểm dương (nếu có)Ngoại kiểm (nếu có)*
Nước cất
Đầu côn 1000 µl
Đầu côn 200 µl
Giấy thấm
Giấy xét nghiệm
Sổ lưu kết quả xét nghiệm
Bút viết kính
Bút bi
Mũ
Khẩu trang
Găng tay
Găng tay xử lý dụng cụ
Quần áo bảo hộ
Dung dịch nước rửa tay
Cồn sát trùng tay nhanh
Dung dịch khử trùng
Khăn lau tay
* Ghi chú: Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).
3. Bệnh phẩm
Huyết thanh hoặc huyết tương của người bệnh
4. Phiếu xét nghiệm
Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu
III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.
1. Lấy bệnh phẩm
- Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh
- Từ chối những bệnh phẩm không đạt yêu cầu
2. Tiến hành kỹ thuật
Bộ sinh phẩm MONOLISA HCV Ag-Ab ULTRA Bio-Rad (VD)
- Chuẩn bị sinh phẩm, sơ đồ nhỏ mẫu
- Nhỏ dung dịch cộng hợp 1
- Nhỏ chứng và bệnh phẩm hoặc mẫu ngoại kiểm (nếu có) theo thứ tự hướng dẫn.
- Đậy tấm phản ứng và ủ ở nhiệt độ và trong thời gian quy định theo quy trình hướng dẫn của nhà sản xuất
- Rửa tấm phản ứng bằng chương trình theo quy trình hướng dẫn của nhà sản xuất
- Nhỏ dung dịch cộng hợp 2 vào các giếng theo hướng dẫn. ủ ở nhiệt độ và thời gian theo hướng dẫn.
- Rửa phiến nhựa và làm khô
- Pha dung dịch cơ chất và nhỏ vào mỗi giếng.
- Để tấm phản ứng trong tối theo quy trình ở nhiệt độ phòng (18oC – 30oC) trong thời gian như hướng dẫn của nhà sản xuất.
- Dừng phản ứng
- Đọc KQ ở bước sóng 450/620 -700 nm bằng máy đo mật độ quang.
IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
1. Điều kiện
PC Ab: Độ hấp phụ của chứng dương Ab
PC Ag: Độ hấp phụ của chứng dương Ag
PCx: Giá trị OD trung bình của chứng dương Ab
CO: Giá trị ngưỡng
Tổng số OD của chứng dương
PCx = -------------------------------------------------------
3
NC < 0,6 x CO
0.800 ≤ PC Ab ≤ 2.400
PC Ag > 0,500
Loại chứng dương PC có giá trị cao hơn 30% so với giá trị PCx. Tiếp tục tính kết quả theo 2 chứng dương còn lại.
PCx
CO = -----------------------------------------------
4
2. Nhận định, trả lời kết quảMẫu huyết thanh:
Mẫu huyết thanh có OD < CO được coi là âm tính.
Cần thận trọng trong trường hợp mẫu huyết thanh có CO -10% < OD<CO.
Trường hợp này phải được xét nghiệm lại .
Mẫu huyết thanh có OD≥ CO cần được xét nghiệm lại.
+ Nếu lần 2 hoặc lần 3 có OD≥ CO, mẫu được coi là dương tính.
+ Nếu 2 lần đều có OD < CO, mẫu được coi là âm tính
V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ
1. Sai sót
Có thể xảy ra hiện tượng âm tính giả hoặc dương tính giả, thông thường do:
- Thực hiện sai các bước trong quy trình hướng dẫn.
- Chứng âm và những mẫu bệnh phẩm âm tính bị nhiễm chéo bởi huyết thanh/ huyết tương có nồng độ kháng thể cao.
- Cơ chất bị nhiễm bởi các tác nhân oxy hoá (thuốc tẩy, ion kim loại v.v…) ,
- Dung dịch dừng phản ứng bị nhiễm bẩn.
2. Xử trí
- Tuân thủ đúng các bước quy trình hướng dẫn của nhà sản xuất và hướng dẫn về độ ổn định hóa chất xét nghiệm trong bộ sinh phẩm sử dụng.
- Kiểm tra và vệ sinh máy rửa thường xuyên trước và sau khi làm xét nghiệm
- Chia hóa chất (chất cộng hợp, dung dịch hiện màu và dừng phản ứng) vào ống nghiệm sạch trước mỗi lần nhỏ.
Theo quyết định số 26 /QĐ-BYT ngày 03 tháng 01 năm 2013