HBsAg miễn dịch bán tự động - Phiên bản có thể in +- Diễn đàn xét nghiệm đa khoa (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan) +-- Diễn đàn: ...:::THẢO LUẬN CHUYÊN NGÀNH:::... (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-8.html) +--- Diễn đàn: Vi sinh Y học (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-71.html) +---- Diễn đàn: Thực hành (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-98.html) +---- Chủ đề: HBsAg miễn dịch bán tự động (/thread-5735.html)

HBsAg miễn dịch bán tự động - tuyenlab - 01-26-2016 HBsAg miễn dịch bán tự động I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ 1. Mục đích Phát hiện kháng nguyên HBsAg của virus viêm gan B (HBV) trong huyết thanh (huyết tương). 2. Nguyên lý Dựa trên nguyên lý của kỹ thuật ELISA (miễn dịch gắn enzym) (VD) II. CHUẨN BỊ 1. Người thực hiện - Người thực hiện Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh. - Người nhận định và phê duyệt kết quả: Cán bộ xét nghiệm có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh. 2. Phương tiện, hóa chất Phương tiện, hóa chất như ví dụ dưới đây hoặc tương đương. 2.1.Trang thiết bị - Dàn máy ELISA. - Máy ly tâm thường. - Tủ âm sâu (-20o C) (nếu có). - Tủ lạnh 2oC - 8oC - Micropipette 100 µl, 1000 µl. - Giá đựng ống máu - Bộ pipetman 8 kênh (nếu có). - Ống đong có vạch dung tích 25ml, 100ml, 1000ml 2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm) Bông Dây garô Tube đựng bệnh phẩm Sinh phẩm chẩn đoán Khấu hao sinh phẩm cho chạy chứng, kiểm tra chất lượng Chứng ngoại kiểm âm (nếu có) Chứng ngoại kiểm dương (nếu có) Ngoại kiểm (nếu có)* Nước cất Đầu côn 1000 µl Đầu côn 200 µl Giấy thấm Giấy xét nghiệm Sổ lưu kết quả xét nghiệm Bút viết kính Bút bi Mũ Khẩu trang Găng tay Găng tay xử lý dụng cụ Quần áo bảo hộ Dung dịch nước rửa tay Cồn sát trùng tay nhanh Dung dịch khử trùng Khăn lau tay * Ghi chú: Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm). 3. Bệnh phẩm Huyết thanh hoặc huyết tương của người bệnh 4. Phiếu xét nghiệm Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên. 1. Lấy bệnh phẩm - Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (xem phụ lục 2) - Từ chối những bệnh phẩm không đạt yêu cầu (xem phụ lục 6). 2. Tiến hành kỹ thuật Bộ sinh phẩm MONOLISA HBsAg UlTra Bio-Rad (VD) - Chuẩn bị sinh phẩm, sơ đồ nhỏ mẫu. - Chuẩn bị dung dịch rửa pha loãng, chuẩn bị dung dịch cộng hợp, chuẩn bị số giếng cần dùng. - Nhỏ chứng và bệnh phẩm theo thứ tự hướng dẫn - Nhỏ dung dịch cộng hợp vào các giếng - Đậy tấm và ủ nhiệt theo quy trình hướng dẫn của nhà sản xuất. - Rửa phiến phản ứng và làm khô - Pha dung dịch cơ chất TMB và nhỏ vào mỗi giếng. - Để ở nhiệt độ phòng (18oC – 30oC) tránh ánh sáng theo quy trình hướng dẫn của nhà sản xuất. - Dừng phản ứng - Đọc kết quả ở bước sóng 450 và 620 nm bằng máy đo mật độ quang. IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ 1. Điều kiện - NC: Độ hấp phụ của chứng âm (R3). - PC: Độ hấp phụ của chứng dương. - CO: Giá trị ngưỡng. - NCx: Giá trị trung bình của chứng âm. - NC ≤ 0,08. - PC ≥ 1,000. - NCx = R3 OD / 4. - Loại chứng âm NC > 0,08 hoặc NC > 40% NCx. Chỉ được loại 1 chứng âm và tiếp tục tính kết quả theo 3 chứng âm còn lại. 2. Nhận định, trả lời kết quả Kết quả Giá trị ngưỡng - Mẫu huyết thanh có giá trị tỉ lệ < 1 được coi là âm tính. - Mẫu huyết thanh có giá trị tỉ lệ ≥ 1 được làm lại. Nếu lần xét nghiệm thứ 2 giá trị tỉ lệ ≥ 1. Mẫu huyết thanh coi là dương tính. - Mẫu huyết thanh có 0,9 < tỉ lệ < 1. xét nghiệm lại 2 lần: + Giá trị tỉ lệ xét nghiệm lặp lại ≥ 1 : mẫu được coi là dương tính. + Giá trị tỉ lệ xét nghiệm lặp lại có 0,9 < tỉ lệ < 1 : nên xét nghiệm lại cho người bệnh bằng phương pháp khác hoặc yêu cầu lấy lại bệnh phẩm. V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ 1. Sai sót Có thể xảy ra hiện tượng âm tính giả hoặc dương tính giả, thông thường do: - Thực hiện sai các bước trong quy trình hướng dẫn. - Chứng âm và những mẫu bệnh phẩm âm tính bị nhiễm chéo bởi huyết thanh/ huyết tương có nồng độ kháng thể cao. - Dung dịch cơ chất bị nhiễm bởi các tác nhân oxy hoá (thuốc tẩy, ion kim loại v.v…) - Dung dịch dừng phản ứng bị nhiễm bẩn. 2. Xử trí - Tuân thủ đúng các bước quy trình hướng dẫn của nhà sản xuất và hướng dẫn về độ ổn định hóa chất xét nghiệm trong bộ sinh phẩm sử dụng. - Kiểm tra và vệ sinh máy rửa thường xuyên trước và sau khi làm xét nghiệm - Chia hóa chất (chất cộng hợp, dung dịch hiện màu và dừng phản ứng) vào ống nghiệm sạch trước mỗi lần nhỏ. Theo quyết định số 26 /QĐ-BYT ngày 03 tháng 01 năm 2013