Neisseria gonorrhoeae PCR - Phiên bản có thể in +- Diễn đàn xét nghiệm đa khoa (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan) +-- Diễn đàn: ...:::THẢO LUẬN CHUYÊN NGÀNH:::... (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-8.html) +--- Diễn đàn: Vi sinh Y học (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-71.html) +---- Diễn đàn: Thực hành (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-98.html) +---- Chủ đề: Neisseria gonorrhoeae PCR (/thread-5652.html) |
Neisseria gonorrhoeae PCR - tuyenlab - 12-31-2015 Neisseria gonorrhoeae PCR
I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ 1. Mục đích Phát hiện sự có mặt bộ gen của Neisseria gonorrhoeae (vi khuẩn lậu) có trong bệnh phẩm. 2. Nguyên lý Dựa trên nguyên lý thuật PCR. II. CHUẨN BỊ 1. Người thực hiện - Người thực hiện: Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh. - Người nhận định và phê duyệt kết quả: Cán bộ xét nghiệm có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh. 2. Phương tiện, hóa chất Phương tiện, hóa chất như ví dụ dưới đây hoặc tương đương. 2.1. Trang thiết bị - Tủ an toàn sinh học tối thiểu cấp 1 - Máy ủ nhiệt - Máy ly tâm 25000 x g - Máy ly tâm dùng cho tube 0,2 ml - Máy vortex - Máy chạy PCR - Các loại pipet điều chỉnh được: 1000µl, 200µl, 100µl, 10µl - Máy điện di - Máy đọc ảnh gel - Tủ lạnh thường - Tủ âm sâu (-200C) hoặc (-700C) (nếu có) - Bộ lưu điện 2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm) Giấy xét nghiệm Dụng cụ lấy bệnh phẩm Găng không có bột (DNase-RNase free) Ống nhựa Ependoff 1.5ml Bút viết kính, bút bi, diêm Xà phòng Khăn lau tay Bông, cồn Nước muối sinh lý Bộ KIT chiết tách DNA Đóng gói 50 phản ứng Khấu hao sinh phẩm cho chứng và QC kiểm tra lại, standard các loại PBS Buffer. Đóng gói 500ml Absolute Ethanol. Đóng gói 1000ml 10mM dNTP mix. Đóng gói 100µl Taq DNA Polymerase, Native Đóng gói: 5 units/µl, 500 units (100 µl) Primer đặc hiệu cho vi khuẩn Neisseria gonorrhoeae Đóng gói 50nM UltraPure DNase/RNase Distilled Water Đóng gói 500ml Ultrapure Agarose Đóng gói 100g Ultrapure TBE Buffer 10X Đóng gói 1000ml 100bp DNA ladder Đóng gói 50ug 10X BlueJuice Gel Loading dye Đóng gói 3x1ml Utrapure 10mg/ml Ethidium Bromide Đóng gói 10ml ống ly tâm 1,7ml Đóng gói 500c/túi ống PCR 0,2 ml, nắp phẳng Đóng gói: 500c/túi, 1000c/hộp Đầu côn 1000ml có lọc Đầu côn 200ml có lọc Đầu côn 0,2-10µl có lọc Dung dịch khử trùng Sổ lưu kết quả xét nghiệm Khay đựng bệnh phẩm Hộp lưu bệnh phẩm Quần áo bảo hộ Mũ Khẩu trang Găng tay xử lý dụng cụ Giấy thấm EQAS (nếu thực hiện)* * Ghi chú: Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm). 3. Bệnh phẩm: Các loại dịch tiết và mô sinh thiết 4. Phiếu xét nghiệm: Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên. 1. Lấy bệnh phẩm Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (Xem Phụ lục 3). 2. Tiến hành kỹ thuật 2.1. Tách chiết DNA từ bệnh phẩm 2.2. Pha hỗn hợp phản ứng PCR 2.3. Chạy phản ứng PCR 2.4. Điện di sản phẩm PCR 2.5. Đọc kết quả IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ - Phản ứng dương tính: có vạch sản phẩm PCR tương ứng với cặp mồi. - Phản ứng âm tính: không có vạch sản phẩm PCR tương ứng với cặp mồi. V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ 1. Sai sót - Phản ứng dương tính giả: do tạp nhiễm từ môi trường - Phản ứng âm tính giả: do phản ứng PCR bị ức chế 2. Xử trí Để hạn chế các hiện tượng trên phải tuân thủ chặt chẽ quy trình kỹ thuật Theo quyết định số 26 /QĐ-BYT ngày 03 tháng 01 năm 2013
|