Diễn đàn xét nghiệm đa khoa
Neisseria gonorrhoeae PCR - Phiên bản có thể in

+- Diễn đàn xét nghiệm đa khoa (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan)
+-- Diễn đàn: ...:::THẢO LUẬN CHUYÊN NGÀNH:::... (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-8.html)
+--- Diễn đàn: Vi sinh Y học (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-71.html)
+---- Diễn đàn: Thực hành (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-98.html)
+---- Chủ đề: Neisseria gonorrhoeae PCR (/thread-5652.html)



Neisseria gonorrhoeae PCR - tuyenlab - 12-31-2015

Neisseria gonorrhoeae PCR



I. MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ

1. Mục đích

Phát hiện sự có mặt bộ gen của Neisseria gonorrhoeae (vi khuẩn lậu) có trong bệnh phẩm.

2. Nguyên lý

Dựa trên nguyên lý thuật PCR.

II. CHUẨN BỊ

1. Người thực hiện
- Người thực hiện: Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.
- Người nhận định và phê duyệt kết quả: Cán bộ xét nghiệm có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh.

2. Phương tiện, hóa chất

Phương tiện, hóa chất như ví dụ dưới đây hoặc tương đương.

2.1. Trang thiết bị

- Tủ an toàn sinh học tối thiểu cấp 1

- Máy ủ nhiệt

- Máy ly tâm 25000 x g

- Máy ly tâm dùng cho tube 0,2 ml

- Máy vortex

- Máy chạy PCR

- Các loại pipet điều chỉnh được: 1000µl, 200µl, 100µl, 10µl

- Máy điện di

- Máy đọc ảnh gel

- Tủ lạnh thường
- Tủ âm sâu (-200C) hoặc (-700C) (nếu có)

- Bộ lưu điện

2.2. Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

Giấy xét nghiệm

Dụng cụ lấy bệnh phẩm

Găng không có bột (DNase-RNase free)

Ống nhựa Ependoff 1.5ml

Bút viết kính, bút bi, diêm

Xà phòng

Khăn lau tay

Bông, cồn

Nước muối sinh lý

Bộ KIT chiết tách DNA Đóng gói 50 phản ứng
Khấu hao sinh phẩm cho chứng và QC kiểm tra lại, standard các loại

PBS Buffer. Đóng gói 500ml

Absolute Ethanol. Đóng gói 1000ml

10mM dNTP mix. Đóng gói 100µl

Taq DNA Polymerase, Native
Đóng gói: 5 units/µl, 500 units (100 µl)

Primer đặc hiệu cho vi khuẩn Neisseria gonorrhoeae
Đóng gói 50nM

UltraPure DNase/RNase Distilled Water
Đóng gói 500ml

Ultrapure Agarose
Đóng gói 100g

Ultrapure TBE Buffer 10X
Đóng gói 1000ml

100bp DNA ladder
Đóng gói 50ug

10X BlueJuice Gel Loading dye
Đóng gói 3x1ml

Utrapure 10mg/ml Ethidium Bromide
Đóng gói 10ml

ống ly tâm 1,7ml
Đóng gói 500c/túi

ống PCR 0,2 ml, nắp phẳng
Đóng gói: 500c/túi, 1000c/hộp

Đầu côn 1000ml có lọc

Đầu côn 200ml có lọc

Đầu côn 0,2-10µl có lọc

Dung dịch khử trùng

Sổ lưu kết quả xét nghiệm

Khay đựng bệnh phẩm

Hộp lưu bệnh phẩm

Quần áo bảo hộ



Khẩu trang

Găng tay xử lý dụng cụ

Giấy thấm

EQAS (nếu thực hiện)*

* Ghi chú:

Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).

3. Bệnh phẩm: Các loại dịch tiết và mô sinh thiết

4. Phiếu xét nghiệm: Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu

III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.

1. Lấy bệnh phẩm

Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (Xem Phụ lục 3).

2. Tiến hành kỹ thuật

2.1. Tách chiết DNA từ bệnh phẩm

2.2. Pha hỗn hợp phản ứng PCR

2.3. Chạy phản ứng PCR

2.4. Điện di sản phẩm PCR

2.5. Đọc kết quả

IV. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

- Phản ứng dương tính: có vạch sản phẩm PCR tương ứng với cặp mồi.

- Phản ứng âm tính: không có vạch sản phẩm PCR tương ứng với cặp mồi.

V. NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

1. Sai sót

- Phản ứng dương tính giả: do tạp nhiễm từ môi trường

- Phản ứng âm tính giả: do phản ứng PCR bị ức chế

2. Xử trí

Để hạn chế các hiện tượng trên phải tuân thủ chặt chẽ quy trình kỹ thuật

Theo quyết định số 26 /QĐ-BYT ngày 03 tháng 01 năm 2013