Diễn đàn xét nghiệm đa khoa
Kỹ thuật lai tại chỗ có gắn chất màu (CISH) - Phiên bản có thể in

+- Diễn đàn xét nghiệm đa khoa (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan)
+-- Diễn đàn: ...:::THẢO LUẬN CHUYÊN NGÀNH:::... (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-8.html)
+--- Diễn đàn: Giải phẫu bệnh (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-73.html)
+---- Diễn đàn: Thực hành (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-110.html)
+---- Chủ đề: Kỹ thuật lai tại chỗ có gắn chất màu (CISH) (/thread-5567.html)

Kỹ thuật lai tại chỗ có gắn chất màu (CISH) - tuyenlab - 12-04-2015

KỸ THUẬT LAI TẠI CHỖ CÓ GẮN CHẤT MÀU (CISH )



I. NGUYÊN LÝ

Xét nghiệm lai tại chỗ sử dụng mồi dò DNA gắn digoxigenin gắn chất mầu diaminobenzidin (DAB) nhằm xác định tình trạng khuyếch đại gen Her-2/neu.

II. CHUẨN BỊ

1. Người thực hiện

- Bác sĩ giải phẫu bệnh – tế bào bệnh học: 01

- Kỹ thuật viên giải phẫu bệnh – tế bào bệnh học: 01

- Cử nhân sinh học (không bắt buộc): 01

2. Phương tiện, hóa chất

2.1. Phương tiện

+ Máy lai biến tính

+ Kính hiển vi quang học

+ Phiến kính, lá kính

+ Máy cắt lát mỏng

+ Lưỡi dao cắt lát mỏng

+ Tủ ấm 37o và 56o

+ Tủ lạnh

+ Ống hút

2.2. Hóa chất

+ Ezprep khử parafin

+ Dung dịch CC2 khử parafin

+ Proteaza

+ Nước bạc

+ Dung dịch SIL ISH DNP CHRC

+ RED ISH DIG FR

+ RED ISH DIG FR

+Thuốc nhuộm hematoxylin

+ Dung dịch Bluing

+ Bộ kít Her-2 và CEP17

+ Cồn (70o, 80o, 85o, 90o, 100o).

+ Xylen

+ Dung dịch rửa

III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

- Mẫu mô được cắt mỏng 4 micromet, gắn lên phiến kính đã được tráng silan

- Cài đặt chương trình cho máy

- Dán nhãn và đặt phiến kính gắn mẫu mô đã cắt vào máy

- Khử parafin bằng EZprep

- Bộc lộ kháng nguyên bằng dung dịch CC2: 30 phút ở 90oC

- Xử lý proteaza: 16 phút

- Ủ mảnh cắt với 100 µl probe Her-2 và CEP17 trong 4 phút

- Biến tính DNA trong 20 phút ở 80oC

- Lai DNA trong 6 giờ ở 37oC

- Rửa bằng nước bạc trong 8 phút ở 72oC

- Ủ trong dung dịch SIL ISH DNP CHRC: 4 phút

- Ủ với RED ISH DIG FR: 24 phút

- Ủ với RED ISH DIG FR: 8 phút

- Nhuộm hematoxylin II trong 4 phút

- Nhuộm với dung dịch Bluing trong 4 phút

- Lấy mảnh cắt ra khỏi máy và làm sạch mảnh cắt

- Làm khô mảnh cắt trong 1 giờ ở 60oC

- Ngâm mảnh cắt trong xylen 3 phút x 2 lần

- Gắn lá kính và đọc kết quả.

IV. ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ

Đánh giá tỷ lệ Her-2/CEP17 bằng cách đếm tín hiệu Her-2 (màu đỏ) và tín hiệu NST17 (màu nâu vàng) trong 20 nhân tế bào ung thư xâm nhập.

+ Tỷ lệ Her-2/CEP17 < 1,8: không khuyếch đại

+ Tỷ lệ Her-2/CEP17 ≥ 2,2: có khuyếch đại

+ Tỷ lệ 2,5 < Her-2/CEP17 ≤ 5: khuyếch đại thấp

+ Tỷ lệ Her-2/CEP17 > 5: khuyếch đại cao

+ Tỷ lệ 1,8 ≤ Her-2/CEP17 < 2,2: khuyếch đại giáp biên, cần đếm lại hoặc đếm thêm trên 20 nhân tế bào u xâm nhập nữa.

Số lượng tín hiệu màu đỏ sẽ xác định số lượng nhiễm sắc thể 17 tùy theo số lượng là 1, 2 và 3 hoặc nhiều hơn tương ứng nhiễm sắc thể 17 đơn bội, lưỡng bội và đa bội.

V. NHỮNG VẤN ĐỀ THƯỜNG GẶP VÀ CÁCH KHÁC PHỤC

[Image: Sb0KHji4PE9GGAmb59ETTi2sJRRqnxqUhco--jJN...48-h214-no]
[Image: 7CHWvJWQWzbhhPC9NciMp1lNOOd10i5NQOvX-8Lt...49-h590-no]

Theo Quyết định Số: 5199 /QĐ-BYT