+- Diễn đàn xét nghiệm đa khoa (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan)
+-- Diễn đàn: ...:::THẢO LUẬN CHUYÊN NGÀNH:::... (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-8.html)
+--- Diễn đàn: Độc chất học (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-96.html)
+---- Diễn đàn: Thực hành (https://xetnghiemdakhoa.com/diendan/forum-116.html)
+---- Chủ đề: [TH] Kỹ thuật xác định thuốc trừ sâu nhóm Clo hữu cơ (/thread-427.html)
[TH] Kỹ thuật xác định thuốc trừ sâu nhóm Clo hữu cơ - tuyenlab - 05-06-2012
1. Nguyên tắc:
Xác định các thuốc trừ sâu nhóm Clo hữu cơ (bao gồm: DDT, BHC (666)...) trong mẫu thử bằng phản ứng cắt Clo hữu cơ, sắc ký lớp mỏng, quang phổ UV- VIS, sắc ký khí...
2. Quy trình kỹ thuật
2.1 Chuẩn bị:
- Dụng cụ: Bát sứ, đũa thuỷ tinh, Bản mỏng Silicagel G hoặc 60GF254, Bình triển khai sắc ký, đầu côn nhỏ, đầu phun sương, quả bóp, máy sấy, máy đo UV, nồi cách thuỷ.
- Hoá chất: NaOH10%. HNO[sub]3[/sub]10%, bạc nitrat5%, NH[sub]3[/sub]10%, n-hexan, aceton, 1% diphenylamin trong cồn. resorcin 2% trong NaOH 10%
- Mẫu thử: Mẫu thử được chiết theo quy trình chung bằng Cloroform hoặc Ether . Mẫu thử lấy từ cắn A.
2.2 Tiến hành.
2.2.1 Phản ứng cắt Clo hữu cơ.
Lấy 1 phần dịch chiết A bốc hơi trên nồi cách thuỷ, thêm vào 2mL dung dich NaOH 10%, đun cách thuỷ 30 phút. Sau đó acid hoá bằng acid nitric 10% tới dư acid rồi thêm 0,5mL dung dịch bạc nitrat 5% sẽ xuất hiện tủa trứng lổn nhổn. Tủa này không tan trong acid nitric loãng nhưng tan trong dung dịch amoniac 10% thừa
2.2.2 Sắc ký lớp mỏng.
- Pha dung môi khai triển n- hexan: aceton với tỉ lệ tương đương 4:1, lắc đều rồi đổ vào bình triển khai (chú ý đổ 1 lượng không quá 1cm chiều cao trong bình triển khai) đậy nắp lại để dung môi hoà trộn đều trước khi đặt bản sắc ký vào ít nhất 15 phút.
- Dùng đầu côn nhỏ chấm khoảng 15µL mẫu thử lên bản mỏng. Đồng thời chấm mẫu chuẩn đối chiếu cách mẫu thử khoảng 1cm. Chú ý chấm cách mép dưới bản mỏng khoảng 1cm và vết chấm càng gọn càng tốt, vừa chấm vừa sấy khô.
- Đặt bản mỏng vào trong bình triển khai đã có sẵn dung môi ở trên. Chờ dung môi ngấm dần lên tới khi cách mép trên 1 -2 cm nhấc bản mỏng ra. Có thể để khô tự nhiên hoặc sấy khô.
- Soi qua đèn tử ngoại để nhận biết sơ bộ.
- Phun thuốc thủ hiện màu:
+ Với DDT, 666: phun thuốc thử 1% diphenylamin trong cồn, để bản mỏng dưới ánh sáng mặt trời 30 phút, vết chấm có màu xanh lá mạ và có Rf trùng với mẫu chuẩn.
2.2.3 Đo quang phổ UV- VIS
- Cách 1: Lấy cặn chiết A đem hoà tan vào Methanol (có thể lọc qua giấy lọc) đo quang phổ UV- VIS.
Kết quả: + DDT cho 2 đỉnh phổ cực đại tại 236nm và 267nm
+ 666 cho 2 đỉnh phổ cực đại tại 284nm và 292nm
- Cách 2: Chạy sắc ký bản mỏng của cặn chiết A sau đó sấy khô, soi đèn tử ngoại dùng bút chì xác định các vết. Cạo các vết này ra hoà tan vào Methanol lọc qua giấy lọc sau đó đo quang phổ UV-VIS. Các đỉnh hấp thụ sẽ tương ứng cho từng chất.
3. Kết quả:
- Mẫu thử phải dương tính với các phương pháp trên mới có thể kết luận.
- Ngoài ra hiện nay để kết quả đạt độ chính xác cao và xác định được hàm lượng dùng kỹ thuật trên máy sắc ký khí có gắn khối phổ (GC-MS)
- Nếu không đủ các điều kiện thử nghiệm trên thì phải tiến hành phân tích sắc ký lớp mỏng chạy trên 3 hệ dung môi khác nhau đối chiếu mẫu chuẩn đều cho kết quả tương đương mẫu chuẩn mới được phép kết luận.