Tìm kiếm mọi thứ bạn cần tại đây
  • 225 Vote(s) - Trung bình 2.69
  • 5
  • 4
  • 3
  • 2
  • 1
Chế độ chủ đề

Kỹ thuật pha thuốc nhuộm giemsa và nhuộm tiêu bản máu tìm ký sinh trùng sốt rét
#1
1. CHUẨN BỊ PHƯƠNG TIỆN.

1.1. Dụng cụ:
- Ống đong các loại 10ml, 20ml.
- Pipet nhỏ giọt.
- Đũa thuỷ tinh.
- Giá nhuộm, giá cắm, các dụng cụ nhuộm.
- Đồng hồ.

1.2. Hoá chất:

- Thuốc nhuộm giemsa mẹ.
- Dung dịch đệm hoặc nước cất.
- Giấy thử pH,máy đo pH.
- Các dung dịch điều chỉnh pH : NaH2PO4 2%, KH2PO4 2%.
- Cồn tuyệt đối.

Cách pha dung dịch đệm (phosphat buffer solution):
- KH2PO4: 0,7g
- NaH2PO4: 1,0g
Cân 2 loại muối trên, mỗi loại vào 1 cốc chứa 150ml nước cất, dùng đũa thuỷ tinh khuấy đều cho tan hết. Đổ 2 loại vào ống đong rồi cho thêm nước cất cho đủ 1000ml. Khuấy đều, kiểm tra và điều chỉnh pH 7,2.

Cách pha dung dịch giemsa nhuộm:

Nhuộm thường quy: dung dịch giemsa 3- 4%: Pha 9,7 ml dung dịch đệm với 0,3ml giemsa mẹ, khi nhuộm để 30- 45 phút.

Nhuộm nhanh: dung dịch giemsa 10%: Pha 9ml dung dịch đệm với 1ml giemsa mẹ. Khi nhuộm để 15- 20 phút.

2. QUY TRÌNH KỸ THUẬT

- Cố định tiêu bản giọt đàn bằng cách tay trái cầm tiêu bản nghiêng 30o, tay phải cầm pipet nhỏ 3- 4 giọt cồn tuyệt đối lên phần đầu của tiêu bản máu. Dùng pipet gạt ngang cho cồn tràn phủ khắp diện tích máu, vừa gạt vừa nghiêng tiêu bản cho cồn chảy hết về đuôi của tiêu bản máu. Cắm tiêu bản lên giá cho khô.

- Đối với tiêu bản giọt đặc quá dày hoặc bị bẩn, mốc thì phải dung giải bằng cách nhỏ nước cất hoặc dung dịch giemsa 1% kín giọt máu, quan sát tới khi màu hồng của máu trôi đi, để lại trên tiêu bản 1 giọt máu màu vàng nhạt là được.

- Pha dung dịch giemsa, tính đúng lượng giemsa cho vừa đủ để nhuộm.

- Xếp tiêu bản lên giá, nhỏ giọt dung dịch thuốc nhuộm phủ kín diện tích máu, để thời gian đúng với quy định.

- Rửa tiêu bản dưới vòi nước chảy nhẹ, không đổ thuốc nhuộm trước, không để nước xối trực tiếp vào giọt máu, để tiêu bản khô tự nhiên( muốn khô nhanh có thể dùng quạt không dùng nhiệt độ).

- Soi kính hiển vi vật kính 100x, trả lời kết quả về ký sinh trùng sốt rét và nhận xét tiêu bản nhuộm.

3. LƯU Ý KHI RỬA TIÊU BẢN:

- Không nên đổ thuốc nhuộm trước khi nhỏ nước rửa, như vậy thuốc nhuộm có thể bám lại lên bề mặt lam máu.
- Tránh rửa tiêu bản giọt đặc dưới vòi nước chảy vì có thể làm bong giọt máu

4. NHẬN XÉT TIÊU BẢN NHUỘM TỐT:

Một tiêu bản nhuộm tốt khi xem dưới kính hiển vi thấy như sau:
- Tiêu bản sạch, không cặn, không bụi, không bị trôi.
- Hồng cầu bắt màu xanh tím hoặc xanh da trời, hoặc có màu hồng nhạt. Nếu có hồng cầu bị nhiễm KST sốt rét, thấy hững hạt sắc tố và hạt đặc hiệu.
- Bạch cầu đơn nhân có màu xanh tím
- Tế bào chất của bạch cầu lympho có màu xanh lơ nhạt.
- Bạch cầu đa nhân trung tính có những hạt to nhỏ không đều màu xanh lơ tới đỏ.
KST sốt rét có hình thể rõ ràng: nhân bắt màu đỏ sẫm hoặc đỏ tía, nguyên sinh chất màu xanh lơ, hạt sắc tố màu tím sẫm hoặc nâu đen ánh vàng.

5. BẢO QUẢN TIÊU BẢN:

Tiêu bản muốn lưu lại lâu dài cần bảo quản tôt. Khi soi xong phải lau sạch dầu trên tiêu bản bằng cách úp tiêu bản lên giấy thấm để loại bớt dầu, sau đó nhỏ 1-2giọt xylen lên phía trên giọt máu rồi dùng vải mềm mỏng sạh lau nhẹ cho sạch. Tiêu bản để chỗ không có ánh sáng, tốt nhất là để trong hộp gỗ.


Chủ đề liên quan...
Chủ đề / Tác giả Trả lời / Xem Bài viết cuối
4 Replies 5,478 Views
Bài viết cuối by ngoc luc bao
03-28-2014, 10:25 AM




Thành viên đang xem chủ đề: 1 Khách

Color Skins

Change Color:

Background Patterns:

Background Images:

Background Header:

Setting Panel

Main Options: